分光光度計(jì)的基本原理是：物質(zhì)在光的照射下會(huì)產(chǎn)生對(duì)光吸收的效應(yīng)，而且物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的。各種不同物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜。因此不同波長(zhǎng)的單色光通過(guò)溶液時(shí)其光的能量就會(huì)被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，即符合比耳定律。
 

　　分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
 

　　分光光度計(jì)的檢驗(yàn)小妙招：
 

　　1.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢驗(yàn)：
 

　　分光光度計(jì)在使用過(guò)程中，由于機(jī)械振動(dòng)、溫度變化、燈絲變形、燈座松動(dòng)或更換燈泡等原因，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過(guò)溶液的波長(zhǎng)不符合的現(xiàn)象，因而導(dǎo)致儀器靈明度降低，影響測(cè)定結(jié)果的精度，需要進(jìn)行檢驗(yàn)。
 

　　檢驗(yàn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度簡(jiǎn)單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測(cè)量?jī)x器的吸收峰值, 如果測(cè)出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定，則需要進(jìn)行波長(zhǎng)調(diào)節(jié)。
 

　　2.透射比正確度的檢驗(yàn)：
 

　　用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10 %、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片，可見(jiàn)光區(qū)分別在440、546、635nm波長(zhǎng)處，以空氣為參比，分別測(cè)量各濾光片的透射比，紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長(zhǎng)處，以高氯酸溶液為參比，測(cè)量其透射比。
 

　　3.穩(wěn)定度的檢驗(yàn)：
 

　　在零點(diǎn)不受光的條件下，用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn)，觀察3分鐘讀取透射比的變化，即為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處，調(diào)節(jié)零點(diǎn)后，蓋上樣品室蓋(打開光門)，使光電管受光，調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化，為光電流穩(wěn)定性。
 

　　4.光的檢驗(yàn)：
 

　　分光光度計(jì)棱鏡式儀器在420nm處，光柵式儀器在360nm處，紫外分光計(jì)在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片，以空氣為參比，測(cè)量其透射比值，即為儀器在相應(yīng)波長(zhǎng)下的雜散輻射率。
 

　　分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)：
 

　　1.該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
 

　　2.使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。
 

　　3.在儀器尚未接通電源時(shí)，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。